Fluorescentie resonansie energieoordrag (FRET)
Fluorescentie-resonansie-energie-oordrag (FRET) is 'n nie-stradiatiewe energie-oordragproses waarin die skenker opgewekte toestand energie oorgedra word na die opgewekte toestand van die aanvaarding deur die interaksie van intermolekulêre elektriese paartjies. Hierdie proses behels nie fotone nie en is dus nie-radiatief. Hierdie toets het die voordele daarvan om vinnig, sensitief en eenvoudig te wees.
Die kleurstof wat in die FRET -toets gebruik word, kan identies wees. Maar in die meeste toepassings word verskillende kleurstowwe eintlik gebruik. Kortom, die oordrag van ligte resonansie -energie is die oordrag van 'n paar dipole van die skenker (kleurstof 1) na die aanvaarder (kleurstof 2) wanneer die skenkergroep opgewonde is. Oor die algemeen oorvleuel die emissiespektrum van die fluorofoorgroep van die skenker met die absorpsiespektrum van die aanvaardingsgroep. "As die afstand tussen die twee fluorofore toepaslik is (10 - 100 a), kan die oordrag van fluorofoorenergie van die skenker na die aanvaarder waargeneem word." Die metode van energie -oordrag hang af van die chemiese struktuur van die reseptor:
1. word omgeskakel in molekulêre vibrasie, dit wil sê die ligte lig van energie -oordrag verdwyn. (Die reseptor is 'n ligte blus))
2. Die emissie is intenser as die reseptor self, wat lei tot 'n rooi verskuiwing in die sekondêre fluorescentiespektrum. ” (Reseptore is ligte emitters).
Die skenkergroep (EDANS) en die aanvaarding van geen (DABCYL) is eenvormig gekoppel aan die natuurlike substraat van MIV -protease, en wanneer die substraat nie ontkoppel is nie, kan DABCYL quenle edans en dan onopspoorbaar word vir fluoor. By MIV-1 protease-ontkoppeling word Edans nie meer deur dabcyl geblus nie, en Edans kan luciferases daarna opgespoor word. Die beskikbaarheid van protease -remmers kan gemonitor word deur veranderinge in die fluorescentie -intensiteit van edans.
FRET -peptiede is gerieflike instrumente om peptidase -nie -spesifisiteit te bestudeer. Aangesien die reaksieproses voortdurend gemonitor kan word, bied dit 'n maklike metode om ensiemaktiwiteit op te spoor. Die glans wat geproduseer word na die hidrolise van peptiedbindings deur die skenker/aanvaarder, bied 'n mate van ensiemaktiwiteit by nanomolêre konsentrasies. As die FRET -peptied ongeskonde is, toon dit 'n skielike verdwyning van die interne flits, maar as enige peptiedbinding oorkant die skenker/acceptor breek, kan dit 'n flits vrystel, wat deurlopend opgespoor kan word en die ensiemaktiwiteit kan dan gekwantifiseer word.
Postyd: 2025-07-02