Fluoresensie-resonansie-energie-oordrag (FRET)
Fluoresensie-resonansie-energie-oordrag (FRET) is 'n nie-stralingsenergie-oordragproses waarin die skenker-opgewekte toestand-energie oorgedra word na die aanvaarder-opgewekte toestand deur die interaksie van intermolekulêre elektriese pare.Hierdie proses behels nie fotone nie en is dus nie-straling nie.Hierdie toets het die voordele dat dit vinnig, sensitief en eenvoudig is.
Die kleurstof wat in die FRET-toets gebruik word, kan identies wees.Maar in die meeste toepassings word verskillende kleurstowwe eintlik gebruik.Kortliks, die oordrag van ligresonansie-energie is die oordrag van 'n paar dipole vanaf die skenker (kleurstof 1) na die aanvaarder (kleurstof 2) wanneer die skenkergroep opgewonde is.Oor die algemeen oorvleuel die emissiespektrum van die Donor-fluorofoorgroep met die absorpsiespektrum van die Akseptorgroep."Wanneer die afstand tussen die twee fluorofore gepas is (10 - 100 A), kan die oordrag van fluorofoorenergie vanaf die skenker na die aanvaarder waargeneem word."Die metode van energie-oordrag hang af van die chemiese struktuur van die reseptor:
1. Word omgeskakel in molekulêre vibrasie, dit wil sê, die lig van energie-oordrag verdwyn.(Die reseptor is 'n ligblusmiddel)
2. Die emissie is meer intens as die reseptor self, wat lei tot 'n rooiverskuiwing in die sekondêre fluoressensiespektrum."(Reseptore is ligstralers).
Die skenkergroep (EDANS) en aanvaardergeen (DABCYL) is eenvormig gekoppel aan die natuurlike substraat van MIV-protease, en wanneer die substraat nie ontkoppel is nie, kan DABCYL EDANS onderdruk en dan onopspoorbaar word vir fluoor.Na MIV-1 protease ontkoppeling word EDANS nie meer deur DABCYL geblus nie, en EDANS luciferases kan daarna opgespoor word.Die beskikbaarheid van protease-inhibeerders kan gemonitor word deur veranderinge in die fluoressensie-intensiteit van EDANS.
FRET-peptiede is gerieflike hulpmiddels om peptidase-nie-spesifisiteit te bestudeer.Aangesien die reaksieproses deurlopend gemonitor kan word, bied dit 'n gerieflike metode om ensiemaktiwiteit op te spoor.Die glans wat geproduseer word na die hidrolise van peptiedbindings deur die skenker/aannemer verskaf 'n maatstaf van ensiemaktiwiteit by nanomolêre konsentrasies.Wanneer die FRET-peptied ongeskonde is, toon dit 'n skielike verdwyning van die interne flits, maar wanneer enige peptiedbinding oorkant die skenker/aannemer breek, stel dit 'n flits vry, wat deurlopend opgespoor kan word en die ensiemaktiwiteit kan dan gekwantifiseer word.
Postyd: 14 Aug. 2023