As 'n hoë presisie-instrument, kan HPLC maklik lei tot 'n paar moeilike klein probleme as dit nie op die regte manier tydens gebruik gebruik word nie. Een van die algemeenste probleme is die kolomkompressieprobleem. Hoe om vinnig 'n foutiewe chromatograaf op te los. Die HPLC -stelsel bestaan hoofsaaklik uit 'n reservoirbottel, 'n pomp, 'n inspuiter, 'n kolom, 'n kolomtemperatuurkamer, 'n detektor en 'n dataverwerkingstelsel. Vir die hele stelsel is die pilare, pompe en detektore die belangrikste komponente en die belangrikste liggings wat geneig is tot probleme.
Die sleutel tot kolomdruk is die gebied wat noukeurig aandag gee aan die gebruik van HPLC. Die stabiliteit van kolomdruk hou nou verband met chromatografiese piekvorm, kolomdoeltreffendheid, skeidingsdoeltreffendheid en retensietyd. Kolomdrukstabiliteit beteken nie dat die drukwaarde stabiel is teen 'n stabiele waarde nie, maar eerder dat die drukskommelingsbereik tussen 345 kPa of 50psi is (wat die gebruik van gradiënt -eluering moontlik maak wanneer die kolomdruk stabiel is en stadig verander). Te hoog of te lae druk is 'n kolomdrukprobleem.
Die meeste geneig tot HPLC -mislukkings en oplossings
1, hoë druk is die algemeenste probleem in die gebruik van HPLC. Dit beteken 'n skielike toename in druk. Oor die algemeen is daar die volgende redes: (1) In die algemeen is dit te wyte aan die verspreiding van die vloeikanaal. Op hierdie punt moet ons dit stukkend ondersoek. a. Sny eers die inlaat van die vakuumpomp af. Op hierdie punt was die PEEK -buis met vloeistof gevul sodat die peekbuis kleiner was as die oplosmiddelbottel om te sien of die vloeistof na willekeur drup. As die vloeistof nie stadig drup of drup nie, word die oplosmiddelfilterkop geblokkeer. Behandeling: Week in 30% salpetersuur vir 'n halfuur en spoel met ultrapure water. As die vloeistof lukraak drup, is die oplosmiddelfilterkop normaal en word dit gekontroleer; b. Maak die suiwerklep oop sodat die mobiele fase nie deur die kolom gaan nie, en as die druk nie beduidend verlaag word nie, word die witkopkop geblokkeer. Behandeling: gefiltreerde witkoppies is verwyder en met 10% isopropanol vir 'n halfuur met 10% gesonikeer. As ons aanvaar dat die druk onder 100psi daal, is die gefiltreerde wit kop normaal en word dit gekontroleer; c. Verwyder die uitgang einde van die kolom, as die druk nie daal nie, word die kolom geblokkeer. Behandeling: As dit 'n buffer soutblokkering is, spoel 95% af totdat die druk normaal is. As die obstruksie veroorsaak word deur 'n paar meer bewaarde materiaal, moet 'n sterker vloei as die huidige mobiele fase gebruik word om na normale druk te jaag. As die langtermyn-skoonmaakdruk nie volgens die bogenoemde metode daal nie, kan die inlaat en die uitlaat van die kolom beskou word as gekoppel aan die instrument, en die kolom kan met die mobiele fase skoongemaak word. Op hierdie tydstip, as die kolomdruk nog nie verlaag word nie, kan die sifplaat van die kolom -ingang slegs vervang word, maar sodra die bewerking nie goed is nie, is dit maklik om tot die vermindering van die kolomeffek te lei, so probeer om minder te gebruik. Vir moeilike probleme kan kolomvervanging oorweeg word.
(2) Verkeerde vloeitempo -instelling: Korrekte vloeitempo kan teruggestel word.
(3) Verkeerde vloei -verhouding: Die viskositeitsindeks van verskillende verhoudings van vloei is verskillend, en die ooreenstemmende stelseldruk van die vloei met hoër viskositeit is ook groter. Indien moontlik, kan laer viskositeitsoplosmiddels vervang of weer ingestel en voorberei word.
(4) Stelseldruk nul drywing: Pas die nul van die vloeistofvlak -sensor aan.
2, is die druk te laag (1) word gewoonlik veroorsaak deur stelsellekkasie. Wat om te doen: vind elke verbinding, veral die koppelvlak aan beide ente van die kolom, en trek die lekarea vas. Verwyder die pos en trek die PTFE -film met 'n toepaslike krag vas.
(2) Die gas kom in die pomp binne, maar die druk is gewoonlik onstabiel op hierdie tydstip, hoog en laag. Ernstiger is dat die pomp nie die vloeistof kan absorbeer nie. Behandelingsmetode: Maak die skoonmaakklep oop en maak skoon teen 'n vloeitempo van 3 ~ 5 ml/min. Indien nie, is lugborrels met 'n toegewyde naaldbuis by die uitlaatklep geaspireer.
(3) Geen mobiele fase -uitvloei nie: kyk of daar 'n mobiele fase in die reservoirbottel is, of die wasbak in die mobiele fase gedompel is, en of die pomp loop.
(4) Die verwysingsklep is nie gesluit nie: die verwysingsklep is gesluit na vertraging. Dit daal gewoonlik tot 0,1. ~ 0,2 ml/ min na die sluiting van die verwysingsklep.
Samevatting:
In hierdie artikel word slegs algemene probleme in vloeistofchromatografie ontleed. In ons praktiese toepassing sal ons natuurlik meer ander probleme ondervind. In fouthantering moet ons die volgende beginsels volg: verander slegs een faktor op 'n slag om die verband tussen die hipotetiese faktor en die probleem te bepaal; Oor die algemeen, wanneer ons onderdele vervang vir probleemoplossing, moet ons let daarop om die ongeskonde onderdele weer op sy plek te plaas om afval te voorkom; Die vorming van 'n goeie rekordgewoonte is die sleutel tot die sukses van fouthantering. Ten slotte, wanneer u HPLC gebruik, is dit belangrik om aandag te gee aan monstervoorbehandeling en behoorlike werking en instandhouding van die toerusting.
Postyd: 2025-07-02