As 'n hoë-presisie-instrument kan HPLC maklik tot 'n paar lastige klein probleme lei as dit nie op die regte manier tydens gebruik bedryf word nie.Een van die mees algemene probleme is die kolomkompressieprobleem.Hoe om 'n foutiewe chromatograaf vinnig op te los.Die HPLC-stelsel bestaan hoofsaaklik uit 'n reservoirbottel, 'n pomp, 'n inspuiter, 'n kolom, 'n kolomtemperatuurkamer, 'n detektor en 'n dataverwerkingstelsel.Vir die hele stelsel is die pilare, pompe en detektors die sleutelkomponente en die hoofplekke wat geneig is tot probleme.
Die sleutel tot kolomdruk is die area wat noukeurig aandag moet kry wanneer HPLC gebruik word.Die stabiliteit van kolomdruk is nou verwant aan chromatografiese piekvorm, kolomdoeltreffendheid, skeidingsdoeltreffendheid en retensietyd.Kolomdrukstabiliteit beteken nie dat die drukwaarde stabiel is teen 'n stabiele waarde nie, maar eerder dat die drukskommelingsreeks tussen 345kPa of 50PSI is (wat voorsiening maak vir die gebruik van gradiënt-elutie wanneer die kolomdruk stabiel is en stadig verander).Te hoë of te lae druk is 'n kolomdrukprobleem.
Die mees geneig tot HPLC-foute en oplossings
1, hoë druk is die mees algemene probleem in die gebruik van HPLC.Dit beteken 'n skielike toename in druk.Oor die algemeen is daar die volgende redes: (1) Oor die algemeen is dit as gevolg van vloeikanaalblokkering.Op hierdie punt moet ons dit stuksgewys ondersoek.a.Sny eers die inlaat van die vakuumpomp af.Op hierdie stadium is die PEEK-buis met vloeistof gevul sodat die PEEK-buis kleiner as die oplosmiddelbottel was om te sien of die vloeistof na goeddunke drup.As die vloeistof nie drup of stadig drup nie, is die oplosmiddelfilterkop geblokkeer.Behandeling: Week in 30% salpetersuur vir 'n halfuur en spoel uit met ultrasuiwer water.As die vloeistof lukraak drup, is die oplosmiddelfilterkop normaal en word dit nagegaan;b.Maak die Purge-klep oop sodat die mobiele fase nie deur die kolom gaan nie, en as die druk nie aansienlik verminder word nie, word die filterwitkop geblokkeer.Behandeling: Gefiltreerde witkoppe is verwyder en vir 'n halfuur met 10% isopropanol gesoniceer.As aanvaar word dat die druk onder 100PSI daal, is die gefiltreerde wit kop normaal en word dit nagegaan;c.Verwyder die uitgangspunt van die kolom, as die druk nie afneem nie, word die kolom geblokkeer.Behandeling: As dit 'n buffersoutblokkasie is, spoel 95% uit totdat die druk normaal is.As die obstruksie deur 'n meer hoogs bewaarde materiaal veroorsaak word, moet 'n sterker vloei as die huidige mobiele fase gebruik word om na normale druk te jaag.As die langtermyn-skoonmaakdruk nie volgens bogenoemde metode afneem nie, kan die inlaat en uitlaat van die kolom beskou word as gekoppel aan die instrument, inteendeel, en die kolom kan met die mobiele fase skoongemaak word.Op hierdie tydstip, as die kolomdruk steeds nie verminder word nie, kan die kolomingangssifplaat slegs vervang word, maar sodra die werking nie goed is nie, is dit maklik om te lei tot die vermindering van die kolomeffek, so probeer om minder te gebruik.Vir moeilike probleme kan kolomvervanging oorweeg word.
(2) Verkeerde vloeitempo-instelling: Korrekte vloeitempo kan teruggestel word.
(3) Verkeerde vloeiverhouding: die viskositeitsindeks van verskillende proporsies vloei verskil, en die ooreenstemmende stelseldruk van die vloei met hoër viskositeit is ook groter.Indien moontlik kan oplosmiddels met 'n laer viskositeit vervang of herstel en voorberei word.
(4) Stelseldruk-nul-dryf: pas die nul van die vloeistofvlaksensor aan.
2, die druk is te laag (1) word gewoonlik veroorsaak deur stelsel lekkasie.Wat om te doen: Vind elke verbinding, veral die koppelvlak aan albei kante van die kolom, en trek die lekarea vas.Verwyder die paal en trek die PTFE-film vas of voer dit met toepaslike krag vas.
(2) Die gas gaan die pomp binne, maar die druk is gewoonlik onstabiel op hierdie tydstip, hoog en laag.Meer ernstig, die pomp sal nie die vloeistof kan absorbeer nie.Behandelingsmetode: maak die skoonmaakklep oop en maak skoon teen 'n vloeitempo van 3~5ml/min.Indien nie, is lugborrels by die uitlaatklep geaspireer met behulp van 'n toegewyde naaldbuis.
(3) Geen mobiele fase-uitvloei nie: kyk of daar 'n mobiele fase in die reservoirbottel is, of die wasbak in die mobiele fase gedompel is en of die pomp loop.
(4) Die verwysingsklep is nie gesluit nie: die verwysingsklep word gesluit na vertraging.Dit daal gewoonlik na 0,1.~ 0.2mL/min nadat die verwysingsklep toegemaak is.
Opsomming:
In hierdie vraestel word slegs algemene probleme in vloeistofchromatografie ontleed.Natuurlik, in ons praktiese toepassing, sal ons meer ander probleme teëkom.By fouthantering behoort ons die volgende beginsels te volg: verander slegs een faktor op 'n slag om die verband tussen die hipotetiese faktor en die probleem te bepaal;Oor die algemeen, wanneer onderdele vervang word vir die oplos van probleme, moet ons aandag gee om die afgetakelde ongeskonde dele terug in plek te plaas om vermorsing te voorkom;Die vorming van 'n goeie rekordgewoonte is die sleutel tot die sukses van fouthantering.Ten slotte, wanneer u HPLC gebruik, is dit belangrik om aandag te skenk aan monstervoorbehandeling en behoorlike werking en instandhouding van die toerusting.
Postyd: 18-Sep-2023