Die Limulus-reagens-tripeptied is 'n tripeptiedstof met 'n spesifieke volgorde wat uit hoefyster-krap-bloedsel-lisaat onttrek word of kunsmatig gesintetiseer is. Die Limulus-reagens-tripeptied is 'n chromogeniese substraat wat gebruik word vir kwantitatiewe analise (soos die bakteriese endotoksientoets) om die komponente van Gram-negatiewe bakterieë op te spoor en te meet—endotoksiene. Wanneer opgewerk deur ensieme wat deur endotoksiene geaktiveer word, word 'n gekleurde verbinding (soos p-nitroanilien) vrygestel, waardeur die kleurintensiteit gemeet en met die endotoksieninhoud gekorreleer kan word.
Werksbeginsel
Endotoksienaktivering: In die teenwoordigheid van endotoksiene stel amebosiete in hoefyster-krabbloed ensieme vry, waardeur die stollingskaskade veroorsaak word.
Ensiemaksie: Die geaktiveerde ensiem (gewoonlik stollende ensiem) werk dan op 'n chromogeniese substraat.
Chromogeniese reaksie: Die ensiem klief die substraat en stel 'n geel verbinding genaamd p-nitroaniline (pNA) vry.
Kwantitatiewe Analise: Die intensiteit van die geel kleur is eweredig aan die endotoksieninhoud in die monster en word gewoonlik met 'n spektrofotometer by 'n absorpsie van 405 nm gemeet.
Voorbereidingsmetodes
Die Limulus reagens tripeptied kan verkry word deur twee benaderings in terme van voorbereiding.
1. Onttrek natuurlike komponente uit Limulus-bloedselle en verkry die aktiewe tripeptied deur skeiding en suiwering.
2. Die gebruik van soliedefase-sintesetegnologie om spesifieke aminosuurvolgordes opeenvolgend te verbind, wat die struktuur van die tripeptied presies beheer.
As gevolg van die bewaringsbeleide vir Limulus (met provinsies soos Zhejiang, Fujian, KwaZulu-Natal en Guangxi wat dit as 'n "provinsiale sleutelbeskermde akwatiese natuurlewe" lys/Hongkong het aan die einde van 2012 regulasies uitgereik wat bodemtreilvissery verbied), en omdat die onttrekkingsproses kompleks en uitdagend is, is die koste van die eerste metode relatief hoog. Daarom word vastefase-sintese nou algemeen gebruik. Deur spesifieke aminosuurvolgordes opeenvolgend te verbind, kan die struktuur van die tripeptied presies beheer word. Hierdie metode verseker nie net die stabiliteit en konsekwentheid van die produk nie, maar maak ook voorsiening vir grootskaalse produksie, wat voldoen aan die behoeftes van die farmaseutiese industrie vir die toets van reagense.
Postyd: 2025-11-04