Agtergrond
Melanotan I, ook bekend as Afamelanotide, is 'n lineêre polipeptied wat bestaan uit 13 aminosure wat gereed is om 'n toenemend belangrike rol in farmaseutiese navorsing te speel. Die primêre Engelse name vir Melanotan I is Melanotan-1 en Afamelanotide. As 'n sintetiese analoog van α-melanosiet-stimulerende hormoon α-MSH), kan Melanotan I gebruik word om fotosensitiwiteitsversteurings wat deur eritropoïetiese protoporfirie veroorsaak word, te behandel. Tans is die meeste Melanotan I-produkte slegs vir navorsingsgebruik gemerk en is nog nie bedoel vir menslike toepassing nie. In tradisionele vastefase-sintese beïnvloed die keuse van hars die koppelingsdoeltreffendheid en finale suiwerheid van die produk aansienlik.
Basiese inligting
Chinese naam: Melanotan 1
Engelse naam: Melanotan-1
Maatskappynommer: GT-A006
CAS No.: 75921-69-6
Volgorde: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Molekulêre Formule: C78H111N21O19
Molekulêre gewig: 1646,88
Voorbereidingsmetode
ek. Voorbereiding van Fmoc-Val-Amino Hars
Stap 1:Weeg 11.11g (5mmol) Ramage Amide AM-hars met 'n substitusiegraad van 0.45mmol/g en voeg dit by 'n vastefase-reaktor. Voeg DCM by om die hars vir 30 minute te laat swel, en dreineer dan. Was drie keer met DMF. Voeg 'n DMF-oplossing wat 20% piperidien (v/v) bevat by en reageer vir 5 minute. Voeg nog 20% piperidien DMF oplossing by en reageer vir 10 minute, met een DMF was tussenin. Nadat die reaksie voltooi is, dreineer en was drie keer met DMF.
Stap 2:Los 5,09 g Fmoc-Val-OH, 2,02 g HOBT (1-hidroksibensotriasool) en 2,32 ml DIC (N,N'-diisopropylkarbodiimied) op in DMF by 0°C. Na volledige ontbinding, voeg die mengsel by die reaksiekolom en reageer by kamertemperatuur vir 1 uur. Monitor die reaksievordering deur die ninhidrientoets te gebruik, om 'n negatiewe resultaat te verseker. Nadat die reaksie voltooi is, was drie keer met DMF om Fmoc-Val-aminohars te verkry.
II. Voorbereiding van volledig beskermde harspeptide van Melanotan I.
Stap 1:Voeg 20% piperidien in DMF-oplossing (volumeverhouding) by die bogenoemde Fmoc-Val-aminohars. Reageer vir 5 minute, voeg dan nog 'n porsie 20% piperidien in DMF oplossing by en reageer vir 10 minute. Was een keer met DMF gedurende die interval. Nadat die reaksie voltooi is, droog onder vakuum en was drie keer met DMF.
Stap 2:Los 5,06 g Fmoc-Pro-OH, 2,02 g HOBT (1-hidroksibensotriasool) en 2,32 ml DIC (N,N'-diisopropylkarbodiimied) op in DMF by 0°C. Na volledige ontbinding, voeg die mengsel by die reaksiekolom en reageer by kamertemperatuur vir 1 uur. Monitor die reaksievordering met behulp van die ninhidrientoets (Kaiser-toets) totdat negatiewe resultate verkry word. Na voltooiing, was drie keer met DMF om Fmoc-Pro-Val-aminohars te verkry.
Stap 3:Volg die metode beskryf in Stap 2, koppel elke aminosuur opeenvolgend volgens die volgorde van Melanotan I. Na voltooiing van die Ac-Ser(tBu)-OH-koppelingsreaksie, was drie keer met DMF, drie keer met DCM (dichloormetaan), en drie keer met metanol. Droog onder vakuum om 23.89g volledig beskermde Melanotan I harsgebonde peptied te verkry.
III. Voorbereiding van Melanotan I Rupeptied
23.89 g van ten volle beskermde Melanotan I hars-gebonde peptied is in 'n ronde-bodem fles geplaas. By 0°C is 250 ml van 'n voorafbereide splytingskemerkelkie (saamgestel uit TFA:tioanisool:fenol:triisopropylsilaan:water = 82.5:7.5:5:3:2 volgens volume) stadig bygevoeg onder roer. Die mengsel is vir 0,5 uur by lae temperatuur gereageer, gevolg deur reaksie by kamertemperatuur vir 2 uur. Die splitsingsoplossing is dan onder vakuum gefiltreer. Hierdie oplossing is stadig onder geroer by 2 L yskoue watervrye diëtieleter gevoeg. Die ru-peptied is deur filtrasie geïsoleer, drie keer met yskoue diëtieleter gewas, en 8,55 g Melanotan I-rupeptied is verkry.
IV. Voorbereiding van Melanotan I Gesuiwerde Peptied
Stap 1:Los die rou Melanotan I-peptied op in 100 ml gesuiwerde water en filtreer deur 'n 0,45 μm membraan om 'n ru-peptiedoplossing te verkry.
Stap 2:Suiwer die ru Melanotan I-peptied deur hoëprestasie-vloeistofchromatografie (HPLC) te gebruik. Gebruik 'n DAC-HB50 dinamiese aksiale kompressiekolom met mobiele fase A (0.05% trifluorasynsuur waterige oplossing) en mobiele fase B (0.05% trifluorasynsuur in asetonitril). Voer gradiënt-eluering uit vir skeiding en suiwering. Spoor die monster op met 'n UV-detektor en versamel die peptiedoplossing wat ooreenstem met die teikenpiek in fraksies.
Stap 3:Na HPLC-suiwering, verkry 180 ml Melanotan I-trifluorasetaatoplossing met 'n suiwerheid van meer as 99%. Konsentreer die oplossing tot 50 ml deur middel van roterende verdamping.
Stap 4:Equilibreer die chromatografiekolom met gedeïoniseerde water en laai 50 ml van die gesuiwerde Melanotan I-trifluorasetaatoplossing (suiwerheid >99%). Elueer vir 50 minute in 'n 2% asynsuur waterige oplossing stelsel. Konsentreer die versamelde teikenproduk tot 80 ml deur middel van roterende verdamping. Voer voorvriesdroging en vriesdroog uit om uiteindelik 5.33 g Melanotan I gesuiwerde peptied te verkry, met 'n opbrengs van 32.33%.
Postyd: 2026-01-05