Oorsig van proteïenuitdrukking

Proteïenxpressie verwys na die tegnologie om die teikengeen in 'n kunsmatige vektor te reproduseer en dit dan in die ontvangersel of selvrye stelsel bekend te stel om die proteïen in die heteroloë stelsel uit te druk.

Proteïenuitdrukking kan die probleem oplos wat inheemse proteïene moeilik is om te verkry. Sedert die eerste vestiging van heteroloë proteïenuitdrukking in die 1970's, is duisende rekombinante proteïene suksesvol uitgedruk, wat die voortdurende ontwikkeling van biotegnologie en biomediese navorsing en industrie effektief bevorder.

Doelwit:

Deur middel van proteïenuitdrukking is dit eerstens moontlik om proteïene te verkry wat moeilik is om uit natuurlike bronne te verkry.

Tweedens vergemaklik die groot groep en 'n hoë suiwerheid van proteïenuitdrukkingsprodukte nie net die ontleding van die teikenproteïen nie, maar verminder dit ook die koste.

Die belangrikste is dat die rekombinante proteïene gewoonlik gekies word om 'n hoë bioveiligheid van die gasheersel aan te dui, en sodoende 'n paar potensiële bioveiligheidsrisiko's van die patogene gasheer te vermy.

Metode:

Dit bevat hoofsaaklik die prosesse van geenfragmentreplikasie, inleiding tot die uitdrukkingstelsel, geïnduseerde uitdrukking, produksuiwering en -analise.

Oorsig van proteïenuitdrukking

Klassifikasie:

Proteïenuitdrukkingstelsels kan oor die algemeen verdeel word in:

1. Kernuitdrukkingstelsel: Escherichia coli is die algemeenste proteïenuitdrukkingstelsel, wat die voordele van duidelike genetiese agtergrond, gerieflike voortplanting, lae koste en hoë uitdrukking het. Dit het egter nie 'n vertaalmodifikasiemeganisme nie en is nie geskik vir glikosilering of spesiale seleksiepunt -splitsing om proteïenuitdrukking te verander nie. Bacillus subtilis kan ook gebruik word vir proteïenuitdrukking, en die voordele daarvan is 'n sterk metaboliese uitdrukkingsvermoë en 'n lae protease -aktiwiteit, wat geleidelik aandag trek.

2. eukariotiese uitdrukkingstelsel: 'n Sekere mate van glikosilering kan bereik word na vertaling, wat nader aan die natuurlike aktiwiteit van eukariotiese proteïene is. Dit is hoofsaaklik ingesluit. ① Gisuitdrukkingsisteem (gewone rooi gis, brougis, ens.), Gis kan met 'n hoë digtheid sag wees, na vertaling verander word, het die voordele van prokariotiese en eukariotiese gasheerselle, en is dit ook 'n goeie proteïenuitdrukkingstelsel. ② Insekseluitdrukkingstelsel: Eksogene gene word in insekselle getransfekteer deur baculovirus -vektor vir uitdrukking. Dit is 'n hoë uitdrukkingstelsel vir eukariotiese proteïene, wat geskik is vir membraanproteïene, makromolekulêre proteïene, proteïenkinases en ander proteïene wat moeilik is om in prokariotiese stelsel uit te druk. ③ Soogdierseluitdrukkingstelsel: Die vertaal- en versieringsdoeltreffendheid van soogdierselle is baie hoër as dié van gis- en insekselstelsels. Die struktuur en funksie van soogdierselle is nader aan inheemse eukariotiese proteïene, maar die uitdrukkingsvlak is laag en die koste is hoog.

3. Selvrye uitdrukkingstelsel: teikenproteïene kan direk van deeltjies en PCR-produkte uitgedruk word, en die uitdrukkingstelsel is selvrye uittreksels uit Escherichia coli, koringembrio's, retikulosiete van die konyn.