1. Watter onsuiwerhede is daar in die nie-HPLC gesuiwerde?
A: Gemodifiseerde peptied- en nie-gemodifiseerde peptied-onsuiwerhede in ru en gedrale gemodifiseerde peptied: soos nie-vollengte gemodifiseerde peptied en sommige grondstowwe soos DTT, TFA, ens.
2. Watter onsuiwerhede word deur HPLC gesuiwer?
A: Die gewysigde peptied wat deur HPLC gesuiwer is, sal steeds baie onsuiwerhede hê, en die onsuiwerhede is gewoonlik kort peptiede en 'n bietjie TFA.
3. Hoe lank is dit geskik?
A: Die sintese van gemodifiseerde peptied moet die lengte van die gemodifiseerde peptied, lading, hidrofilisiteit en hidrofobisiteit en ander faktore oorweeg. Hoe langer die totale lengte, hoe laer is die suiwerheid en opbrengs van die ru -produk, en hoe hoër is die probleme van suiwering en die waarskynlikheid van sintese. Daar is egter geen manier om die volgorde van die funksionele domein van die gemodifiseerde peptied te verander nie, maar om die sintese van die gemodifiseerde peptied te voltooi, kan slegs sommige hulpaminosure in die stroomop en stroomaf van die funksionele domein bygevoeg word om die oplosbaarheid en hidrofobisiteit van die gemodifiseerde peptied te verbeter. As die gewysigde peptied te kort is, kan daar probleme in die sintese wees. Die eerste probleem is dat die gesintetiseerde gewysigde peptied sekere probleme in die na-verwerkingsproses het. Die gemodifiseerde peptied binne 5 peptiede het gewoonlik hidrofobiese aminosure, anders is die na-verwerking moeilik. Gemodifiseerde peptiede onder 15 aminosuurreste kan oor die algemeen met 'n bevredigende opbrengs en opbrengs verkry word.
Sommige vrae en antwoorde oor die oplosbaarheid van gewysigde peptiede
4. Hoe kan u die oplosbaarheid van die gewysigde peptied uit die volgorde beoordeel?
(1) Die gemodifiseerde peptied wat 'n groot hoeveelheid hidrofobiese aminosure bevat, soos Leu, Val, IIE, MET, PHE en TRP, is nie maklik oplosbaar in waterige oplossing of byna onoplosbaar nie. Hierdie aminosuur kan problematies wees in suiwering of sintese.
(2) the proportion of hydrophobic amino acids under normal conditions < The proportion of charged amino acids can reach up to 20%. If the N or C of the modified peptide is short, the increase of polar amino acids can also improve the solubility.
5. Waarom is dit moeilik om Cys, MET of TRP te sintetiseer?
A: Gemodifiseerde peptiede wat Cys, MET of TRP bevat, kan nie gesintetiseer word nie, en produkte met 'n hoë suiwerheid is moeilik om te verkry. Dit is hoofsaaklik te wyte aan die feit dat hierdie groepe minder stabiel is en geneig is tot oksidasie. Gebruik en opberging van hierdie gewysigde peptiede benodig spesiale sorg om die herhaalde opening van die deksel te voorkom.
6, waarom sal 'n sintetiese opbrengs of suiwerheid baie laag wees?
A: Daar is 'n aansienlike verskil tussen die sintese van gemodifiseerde peptiede en die sintese van primers. Daar is baie min primers wat nie gesintetiseer kan word nie, maar daar is dikwels gewysigde peptiede wat nie gesintetiseer kan word nie. Soos Val, Ile, Tyr en TRP, Leu, Phe, GLN en THR -aminosuur naby of lus, gemodifiseerde peptiede kan nie opgelos word in die sintese -proses nie, sintetiese doeltreffendheid is laer. Die doeltreffendheid van sintese en die suiwerheid van die produk is in die volgende gevalle baie laag, soos: herhaal pro, Ser-Ser, herhaal ASP, vier opeenvolgende Gly, ens.
7. Hoe word dit gesuiwer?
A: Gemodifiseerde peptiede word oor die algemeen gesuiwer deur omgekeerde fase-kolom (soos C8, C18, ens.) Op 214Nm. Die bufferstelsel is oor die algemeen 'n oplossing wat TFA, pH2.0 bevat. Buffera bevat 0,1%TfainDDDH2O, en BufferB bevat 1%TFA/ACN/PH2,0. Dit is voor suiwering in Buffera opgelos; As die oplossing nie bevredigend is nie, los dit op met bufferb, verdun dan met buffera; Vir hoogs hidrofobiese gemodifiseerde peptiede word soms 'n bietjie mierasuur of asynsuur bygevoeg.
Postyd: 2025-07-01