Proteïne -suiwering is die proses om proteïenfraksies van 'n spesifieke doel van weefsels, selle of proteïenmengsels te skei. Proteïne -suiwering moet nie net 'n sterk suiwerheid van die geïsoleerde proteïen bevorder nie, maar ook die biologiese aktiwiteit van die proteïen handhaaf. Daarom is dit nodig om een of meer kombinasie -suiweringskemas volgens verskillende proteïen -eienskappe te ontwerp. Die belangrikste strategie vir proteïenuiwering is om die ooreenkomste en verskille tussen verskillende proteïene te benut. Op grond van die ooreenkoms tussen proteïene, kan nie-proteïenmateriaal verwyder word, en dan kan die teikenproteïen geskei word op grond van die proteïenverskille. Veral met die vinnige ontwikkeling van genetiese ingenieurswese -tegnologie, hoewel baie proteïene uitgedruk word deur genetiese rekombinasie, hou die vlak van proteïen suiwering direk verband met die suiwerheid en aktiwiteit van die proteïen. Daarom bly proteïenuiwering 'n belangrike onderwerp in die moderne biotegnologie.
Objektief
Aan die een kant is die isolasie en suiwering van proteïene veral belangrik vir die diepgaande studie van die struktuur en funksie van proteïene, en aan die ander kant hou die skeiding en suiwering van proteïene ook direk verband met die toepassingseffek van proteïene. Daarom speel proteïenuiwering 'n belangrike rol in die navorsing en toepassing van biologiese wetenskap, en proteïenskeiding en suiweringstegnologie is ook 'n belangrike tegnologie in die biologiese industrie.
Die manier
Die beginsel van proteïenuiwering is om die teikenproteïen met redelike doeltreffendheid, tempo, opbrengs en suiwerheid te skei, terwyl die biologiese aktiwiteit en chemiese integriteit gehandhaaf word. Die belangrikste stappe sluit in die seleksie van eksperimentele materiale, voorbehandeling, proteïne -ekstraksie, ru -proteïenklassifikasie, fyn proteïenklassifikasie en proteïenidentifikasie.
Die suiweringsproses moet let op: 1 om die impak op proteïenaktiwiteit te verminder, soos om te hoog of te lae pH-, hoë temperatuur en swaar metaal -effekte te voorkom; 2. Werk by lae temperatuur; 3. Probeer om die leidende vlak van proteïeninhoud in die monster te hou.
Klassifikasie van
Proteïne -suiwering kan volgens die tipe suiweringsmetode geklassifiseer word:
I. neerslagmetode, insluitend soutafsetting, met behulp van soutione om die gestolde laag op die oppervlak van die proteïen te vernietig, die hidrofobiese gebied bloot te stel, en dan afsetting om die doel van voorlopige suiwering te bereik; Organiese afsetting, met behulp van organiese oplosmiddels om die wateraktiwiteit te verminder, vernietig die gekoaguleerde film op die proteïenoppervlak, wat lei tot proteïen neerslag. Neerslag is 'n ligte suiweringsmetode, maar die suiwerheid is nie hoog nie en kan as 'n primêre suiweringsproses gebruik word.
Twee, dialise -metode, insluitend dialise -sak en ultrafiltrasiemetode. Deur dialise en ultrafiltrasie kan klein molekulêre onsuiwerhede uitgeskakel word, en die proteïenoplossing kan ook vervang word.
3. chromatografiese metodes sluit in molekulêre sifgelchromatografie, ioonuitruilchromatografie, affiniteitschromatografie (metaalchelating affiniteitschromatografie, proteïen A/g -chromatografie, reseptorproteïen, substraat, ens.), Hidrofobiese chromatografie, omgekeerde chromatografie en hoëprestasie vloeistofchromatografie. Om beter resultate te behaal, is 'n kombinasie van twee chromatografiese metodes, soos affiniteitschromatografie en ioonuitruilchromatografie, dikwels nodig.
Benewens bogenoemde metodes, is daar baie ander suiweringsmetodes, soos die sentrifugering van die digtheidsgradiënt, wat geskik is vir die produksie van proteïene met 'n hoë suiwerheid, maar hoër eksperimentele toestande benodig. Proteïenkristalle is geskik vir biologiese struktuuranalise, soos X-oordrag.
Postyd: 2025-07-01